基因转化的主要步骤

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1:目的基因的获取。有三种方法（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增目的基因（3）人工合成

2：基因表达载体的构建。这个载体一般是质粒。

3：将目的基因导入受体细胞。这个导入植物细胞一般用农杆菌转化法，也可用基因枪法或花粉管通道法。导入动物细胞一般用显微注射法。导入微生物细胞一般用感受态细胞吸收DNA分子的方法。

4：目的基因的检测与鉴定。这个分为4步：（1）用DNA分子杂交技术检测目的基因是否进入受体细胞（2）用分子杂交技术检测目的基因是否转录出RNA（3）用抗原抗体杂交技术检测目的基因是否翻译出蛋白质（4）进行生物个体水平的鉴定（这步不是一定的，也可不进行）。进行生物个体水平的鉴定举个例子就是比如让虫子去啃食导入抗虫基因的植株，看是否抗虫。

基因枪（particle：gun）介导转化法又称微弹轰击法（microprojectile：bombardment，particlebombardment，biolistic），是指利用火药爆炸、高压气体和高压放电作为驱动力（这一加速设备称为基因枪），将载有目的基因的金属颗粒加速，高速射入植物组织和细胞中，然后通过细胞和组织培养技术，再生出新的植株。

根据动力系统，可将基因枪分为三种类型，第一类是利用火药爆炸力作为加速动力；第二类是以高压气体作为动力；第三类是以高压放电作为驱动力。美国Cornell大学最早研制了火药为动力的基因枪，1990年，美国杜邦公司推出了商品基因枪PDS-1000系统。此后，高压放电、压缩气体驱动等各种类型的基因枪相继出现，并在实际应用中得到不断改进和发展，使基因枪转化法成为继农杆菌介导转化法之后又一广泛应用的转化技术。

尽管基因枪有各种不同的类型，但基因枪转化的基本步骤如下：①受体细胞或组织的准备和预处理；

②DNA微弹的制备；

③受体材料的轰击；

④轰击后外植体的培养和筛选。该方法一经产生就得到了广泛应用，具有如下一些优点：①无宿主限制，无论是单子叶植物和双子叶植物都可以应用；

②可控度高，操作简便迅速，商品化的基因枪都可以根据实验需要调控微弹的速度和射入浓度，命中特定层次的细胞；

③受体类型广泛，原生质体、叶圆片、悬浮培养细胞、茎、根以及种子的胚、分生组织、愈伤组织、花粉细胞、子房等几乎所有具有分生潜力的组织或细胞都可以用基因枪进行轰击；

④可将外源基因导入植物细胞的细胞器，并可得到稳定表达。正因为基因枪这些优点，使基因枪成功地应用于植物基因转化，特别是单子叶植物的转化和外源基因导入植物细胞器等。但基因枪转化率差异很大，相对于农杆菌介导的转化率要低得多，一般在0.1%1%之间，但有的报道其转化率高达2.0%；转化成本高；嵌合体比率大；遗传稳定性差；而且整合进植物细胞基因组中的外源基因通常是多拷贝的，可导致植物自身的某些基因非正常表达，还可能发生共抑制现象（co-suppression）。

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